뽀닥사의 실험노트

cDNA란, complementary DNA의 약자로, 상보적 DNA라고 합니다. 이는 mRNA(전령 RNA)로부터 역전사 효소(reverse transcriptase)를 이용해 합성한 DNA입니다.DNA는 두 종류(단백질 합성 코드를 가지고 있는 엑손(exon), 가지고 있지 않은 인트론(intron))의 서열로 이루어져 있는데, cDNA는 인트론(intron)이 존재하지 않는 DNA서열입니다. 즉, 단백질 합성에 필요한 정보만을 가진 DNA서열입니다. 왜 cDNA를 만들까?mRNA는 세포에서 단백질을 만들기 위한 유전 정보만을 포함하고 있지만, RNA는 불안정하고 실험에 사용하기 어려워서, 안정적인 형태의DNA로 바꾸어 사용합니다. 바로 이때 만드는 것이 cDNA입니다. ice, PCR machine..

RNA prep from Chlamydomonas 1x10^8 cell 준비(cell 상태가 중요함)seed culture 후 2-3일 배양한 cell 사용 1. Take the tube out of the liquid nitrogen and immediately add 1ml of Trizol to the frozen pellet colse the tube and vortex for 10min (Ensure that there is complete mixing). Incubate the homogenized sample for another 5min at room temperature to permit the complete dissociation of nucleoproitein complexes. C..

T-Blunt PCR Cloning Kit(SolGent) Cat. No. SOT01-K020 & TOPcloner TA-Blunt core kit(enzynomics) Cat. EZ017M Taq 뿐만 아니라 Pfu DNA polymerase에 의해 증폭된 모든 PCR 산물의 빠른 cloning에 적합, Topoisomerase I 의 활성에 의하여 상온에서 5분 안에 cloning이 가능한 제품. viable selection system을 도입하여 PCR 산물이 cloning 된 경우에만 colony가 자랄 수 있어 vector self-ligation에 의한 colony의 생성을 원천적으로 막아줌 1. Ligations Using T-Blunt vectors and the 6X T-Blunt bu..

ligation pGEM-T Easy vector(Promega) 1. reagent- 2x Rapid Ligation Bo, T4 DNA ligase : 5ul- pGEM-T Easy vector(50ng) : 1ul- insert DNA : 3ul (양에 따라서 16ng/ul 일때 3ul 넣음)- T4 DNA Ligase(3 Weiss units/ul) 1ul- Deionized water to a final volume of : 10ul16℃ O/N 2. E.coli transformation- competent cell(BIOFACT cat.no.SOT41-K020) ice에 녹일 것, ligate도 같이 ice에 놓을 것, incubate 미리 켜놓을 것 42℃- ligate mixing (pe..

미세조류 Chlamydomonas rainhardtii 의 DNA 추출하는 방법이다. 시약SDS-EB buffer(2%SDS, 400mM NaCl, 50mM EDTA, 100mM Tris-HCl pH8.0)PCI(25:24:1, phenol:chloroform:isoamylalcohol), pH8.0 (주)바이오세상100% EtOH, 70% EtOHTE bufferRNaseA(20mg/ml, Invitrogen, 12091021) 1. 배양한 cell 중, 1x10^7 cells ~ 2 x 10^7 cells 사용 2. Resuspend cells in 200ul of H2O, add 400ul of SDS-EB buffer, and vortex to mix.200ul H2O 넣은 후 400ul SDS-..