뽀닥사의 실험노트

Random Primer DNA Labeling Kit(TAKARA)cat.#6045 v0802 Takara [α-32P], [3H]dCTP로 DNA를 표식하여 hybridization용 DNA 프로브를 제작하는 키트이다. Feinberg와 Vogelstein의 방법을 개량하여 간단한 조작으로 높은 비방사활성의 DNA 프로브를 제작할 수 있다.또 Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2는 3’→ 5’exonuclease 활성을 제거한 Exo-free Klenow Fragment와 Random Primer (9 mer)를 조합하여 표식하므로써 1×109dpm/㎍의 높은 비방사활성 프로브를 단시간 (10분 이내)에 제작할 수 있다. 시약Random Primer (9mer)10x Bu..

T-Blunt PCR Cloning Kit(SolGent) Cat. No. SOT01-K020 & TOPcloner TA-Blunt core kit(enzynomics) Cat. EZ017M Taq 뿐만 아니라 Pfu DNA polymerase에 의해 증폭된 모든 PCR 산물의 빠른 cloning에 적합, Topoisomerase I 의 활성에 의하여 상온에서 5분 안에 cloning이 가능한 제품. viable selection system을 도입하여 PCR 산물이 cloning 된 경우에만 colony가 자랄 수 있어 vector self-ligation에 의한 colony의 생성을 원천적으로 막아줌 1. Ligations Using T-Blunt vectors and the 6X T-Blunt bu..

ligation pGEM-T Easy vector(Promega) 1. reagent- 2x Rapid Ligation Bo, T4 DNA ligase : 5ul- pGEM-T Easy vector(50ng) : 1ul- insert DNA : 3ul (양에 따라서 16ng/ul 일때 3ul 넣음)- T4 DNA Ligase(3 Weiss units/ul) 1ul- Deionized water to a final volume of : 10ul16℃ O/N 2. E.coli transformation- competent cell(BIOFACT cat.no.SOT41-K020) ice에 녹일 것, ligate도 같이 ice에 놓을 것, incubate 미리 켜놓을 것 42℃- ligate mixing (pe..

Agarose Gel Extraction kit (INTRON) 준비: incubate 55℃, Elution Bo 같이 넣음 PCR로 증폭시킨 PCR product를 agarose gel에 로딩 시킴※agarose gel을 만들 때 긴 wall인 comb를 준비함 1. agarose gel에 로딩하여 원하는 위치의 band를 자름(최대한 잘게) 2. e-tube 무게 잰 후, gel 무게 확인 3. gel 무게의 3배 Lysis Bo 넣고 vortexing 4. 55℃ 10min 2~3min 마다 mix vortexing(손으로 흔들어줘도 됨) 5. 살짝 down 6. column에 넣고 centrifuging 13000rpm x 1min (양이 많으면 나눠서 돌림 한번에 700ul까지만) 7. Was..

Plasmid DNA purification (NucleoBond Xtra Midi) kit Macherey-nagel 1. cultivate and harvest bacterial cells4500-6000xg 4℃, 15min 2. cell lysis8mL buffer RES(4℃) vertex로 cells을 풀어준다8ml buffer LYS 5번 이내로 inverting 많이하게 되면  RT, 5min 기다리는 동안 3번 진행 3. Equilibaration of the column and filter12ml buffer EQU cells을 키운 삼각플라스크에 준비 4. Neutralization8ml buffer NEUmix by gently inverting 10-15 times 청색에서 흰색으..