Application of Extinction Coefficients for Quantification of Chlorophylls and Bacteriochlorophylls(MICROBIOLOGY Vol. 78 No. 6 2009)
용매에 따른 계산식
methanol (in ug/ml)
Chl a = 16.29 A(665) - 8.54 A(652)
Chl b = 30.66 A(652) - 13.58 A(665)
Chl a + b = 22.12 A(652) + 2.71 A(665)
80% ethanol (in ug/ml)
Chl a = 12.25 A(663) - 2.55 A(646)
Chl b = 20.31 A(646) - 4.91 A(663)
Chl a + b = 17.76 A(646) + 7.34 A(663)
90% acetone (in ug/ml)
Chl a = 11.85 A(664) - 1.54 A(647) - 0.08 A(630)
Chl b = 21.03 A(647) - 5.43 A(664) - 2.66 A(630)
Chl c1 + c2 = 24.52 A(630) - 7.6 A(647) - 1.67 A(664)
Chlamydomonas, chlorella 같은 경우 ethanol & acetone에는 chlorophylls이 다 빠지지 않았다. 그래서 100% methanol로 처리 했음
실험 방법
1. 동일한 cell 양을 맞출 것
OD750(pigment가 영향을 미치지 않는 값) = 1.0으로 함(값 피크를 봤을 때 조금 적은 양인 듯)
2. 1.5ml tube에 넣은 후 centrifuge
3. methanol 1ml 넣어 vortex (cell에 색소가 다 빠져나갈 때까지, methanol이 팁에서 흘러내리니 한두번 pipetting 후 사용 OD750으로 맞춘 cell을 1ml로 하지않고 OD750/1.2ml로 해서 methanol을 1.2ml 넣어서 측정하면 좋음 OD값 확인할 때 1ml보다 부족할 수 있음)
4. cell down 후 OD값 확인
